Prueba para HIV

Uni-Gold de Trinity Biotech

Introducción

El SIDA es una enfermedad infecciosa causada por el virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH); es hasta ahora incurable e infecciosa, aunque con el paso del tiempo el pronóstico ha mejorado.  El principal mecanismo de contagio es el contacto sexual con una persona infectada, pero también se puede  adquirir por contacto directo con sangre contaminada e incluso por vía perinatal, aunque ante este caso ahora se han desarrollado mecanismos de prevención.

El VIH es un lentivirus, así que su periodo de incubación en general es muy largo que puede llegar hasta los 6 ó más años, durante los cuales el individuo se siente aparentemente bien, pero es contagioso (seropositivos).

El virus destruye los mecanismos de defensas de organismo ante la infección de forma lenta. Por ello el enfermo de Sida queda expuesto a desarrollar infecciones graves por oportunistas y tienden a tener cierto tipo de tumores malignos.

No existe un tratamiento específico para esta enfermedad, ya que se administran distintos anti virales y otra gran variedad de fármacos para atender las otras infecciones que se están presentando.

Fundamento

La Prueba para HIV Uni-Gold de Trinity Biotech es un ensayo individual para la detección de Ac para el virus de la Inmunodeficiencia Humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total. El HIV se ha reconocido como el agente etiológico del SIDA. La mayoría de los pacientes con Sida o Complejos Relacionados con SIDA (ARC) tienen Ac para las proteínas estructurales del virus HIV.                                     

La infección por HIV se diagnostica mediante la detección de Ac específicos para el virus. La prueba Uni-Gold es un inmunoensayo rápido basado en el principio del sándwich inmunocromatográfico. Esto es solo una prueba denominada de escrutinio ya que se realizan como pruebas iniciales, por tal motivo se deben de hacer otras para confirmar el diagnóstico inicial como la de ELISA la que tiene un 99.84% de sensibilidad o la de Western Blot. Las técnicas de hemaglutinación necesitan ser interpretadas detenidamente.

Un resultado positivo significa que el individuo estudiado ha sido contagiado por el virus HIV y por lo tanto es un portador.

Prueba para HIV

Material:

§      Cartucho de prueba

§      Reactivo de lavado

§      Pipetas desechables

§      Equipo para venopunción

§      Sangre (suero o plasma)

Técnica:

1.    Usando una pipeta desechable tomemos la muestra.

2.    Colocar la pipeta sobre el área de muestra del cartucho y agrega 2 gotas de muestra.

3.    Adicionar 2 gotas del reactivo de lavado también al área de muestra.

4.   Esperar 10 minutos para que la reacción ocurra (tiempo de incubación)

Nota:                                                                                                                                                                     Lo más recomendable es realizar la lectura inmediatamente después del tiempo de incubación.

Interpretación de Resultados                         

¥  Negativo         Una línea en el área de control, únicamente indica un resultado negativo.

¥  Invalido           Ausencia de una raya en el área de control. El resultado deberá de repetirse en un cartucho nuevo

¥  POSITIVO           Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segu8nda línea en el área de control indica un resultado positivo.

Resultados

.Nombre paciente:              ¿?

Edad:                                      32 años

Sexo:                                 Masculino

Positivo (+)

a Ac contra virus HIV

Conclusiones

Este tipo de pruebas son útiles en el diagnostico inicial del SIDA, ya que al estar basado en el principio del sándwich inmunocromatográfico detecta fácilmente los Ac para el virus HIV.

Sin embargo no es definitivo, de tal manera que se deben de usar otros métodos que confirmen los resultados iniciales.

Un posible resultado negativo no excluye la posibilidad de ser portador del virus, así que como precaución se deben de volver a realizar en diferentes meses, esto se debe por el largo periodo de incubación de HIV.

Advanced Quality

One Step HBsAg Test

Introducción

La Hepatitis es una inflamación aguda del hígado. Puede ser producida por una infección, habitualmente viral, por sustancias tóxicas o por fármacos.

Los virus que infectan el hígado son de varios tipos. Algunos de ellos inducen (no en todos los pacientes) inmunidad para toda la vida, pero sólo para ese tipo de virus.

El virus se halla en casi todos los fluidos corporales de las personas infectadas: saliva, lágrimas, semen, leche, líquido sinovial, etc. aunque son mucho menos infecciosos que la sangre. Actualmente las Hepatitis virales, en especial la B y C son la causa de la mayor parte de las muertes en México, incluso más que el SIDA.

Fundamento

Los inmunoensayos sándwich de fase sólida para la detección del HBsAg fueron descritos por Wisdom. Previamente se reportó la producción, caracterización y aplicación de Ac monoclonales para la determinación de HBsAg.

Esta prueba es un inmunoensayo de oro coloidal que detecta el Ag de superficie de la Hepatitis B en sangre total, suero o plasma. El anti-HBsAg es inmovilizado en la región de prueba en la membrana de nitrocelulosa. En el ensayo la muestra inicial reacciona con el complejo del Ac monoclonal-conjugado de oro coloidal en el área de la muestra. Esta muestra emigra a través de la membrana por acción capilar y reacciona con el anti-HBsAg en la región de prueba.

Si la muestra contiene HBsAg se formará una banda coloreada en esta región. Si no hay Ag en la muestra no se formará la línea, indicando el resultado negativo. Una banda coloreada siempre se formará en la región control lo que indica que el resultado de la prueba es válido.

Prueba para detectar Ag de Hepatitis B

Material:

      Cartuchos de pruebas

      Pipetas desechables

      Material para venopunción

      Sangre total/suero/plasma

Procedimiento:

1.       Con ayuda de una pipeta desechable, dispensar 100 Ul, es decir 3 gotas de la muestra control en los pocillos de muestra del cartucho.

2.      Dejar reposar durante 15 minutos y después hacer la lectura.

Interpretación de resultados:

POSITIVO:

En adición a la banda control, también aparece una banda coloreada distinta en la región de prueba. Una concentración baja se observará u8na banda un poco más leve.

NEGATIVO:

Solamente aparece una banda coloreada en la región de control.

INVALIDO:

No aparece ninguna banda de prueba ni de control. La muestra debe correrse nuevamente utilizando otro cartucho de prueba huevo.

Resultados

Nombre:   ¿?

Negativo (+)

a HBsAg por Hepatitis B

Conclusiones

Esta prueba es de gran utilidad en el diagnóstico inicial de la Hepatitis B, aunque su especificidad no es altamente confiable, a pesar de de la fuerte asociación entre la presencia de HBsAg y de la infección; los métodos disponibles para la determinación de Ag son más sensibles para la determinación de HBsAg; así que en un resultado positivo de esta se debe de corroborar con estos métodos más exactos.

Hematocrito

Fundamento

Es uno se los métodos mas sencillos, mas exactos y valiosos de la practica hematológica que se puede realizar en el laboratorio clínico.

            Hematocrito se defina como el examen que mide el porcentaje de volumen de toda la sangre que esta compuesta de Glóbulos Rojos.

            Las principales razones por las que se realiza este examen es sospecha de anemia, déficit en la dieta, entre otras afecciones.

Macro-Hematocrito

(Wintrobe)

§      Material y equipo de laboratorio:

-          Muestra biológica                Sangre

-          Equipo para Venopunción (torundas, ligadura tubo c/n anticoagulante)

-          Tubo de Wintrobe

-          Pipeta Pasteur

-          Centrífuga

§      Técnica:

1.   Obtener de 3-5 ml de sangre venosa. Llenar un tubo de ensaye con anticoagulante. Mezclar invirtiéndolo 60 veces.

2.  Se llena un tubo de Wintrobe hasta la marca de 0-10, utilizando una pipeta Pasteur de tallo largo, introduciéndola hasta el fondo y dejando salir lentamente la sangre a medida que se va sacando la pipeta, asegurándose de que la columna de sangre sea continua, sin burbujas de aire (puede producir hemólisis).

3.  Centrifugar el tubo de Wintrobe a 3000 rpm durante 30 min.

4.  La altura de la columna de eritrocitos sedimentados (sin contar la capa blanca de leucocitos por encima de ella) leída en centímetros se multiplica por 10 para ver el valor hematocrito expresado como porcentaje, es decir, el volumen de células centrifugadas de sangre.

                               Micro-Hematocrito        

Material y equipo de laboratorio:

-          Muestra biológica                Sangre

-          Tubo capilar

-          Microcentrifuga

-          Plastilina o fuego

-          Mechero

-          Regla

§      Técnica:

1. Con la sangre que ya tenemos, llenamos el tubo capilar hasta las ¾ partes de su longitud.                                        2. El extremo seco del tubo se sella con un poco de plastilina, o con ayuda del mechero, girando el tubo para evitar derrames.

3. Centrifugamos el tubo a 10, 000 rpm – 12 rpm, durante 5 min. asegurándonos de que el extremo cerrado de los tubos quede hacia afuera.

4. Sacamos los tubos de la Microcentrifuga y se mide la columna de los hematíes, realizando una regla de 3, los resultados se multiplican x10 para dar la cifra del hematocrito expresado en tanto por ciento.

§      Valores normales

      Hombre:     47.0 +- 5.0 %

      Mujer:         42.0 +- 5.0% 

Resultados:

Macro-Hematocrito:

4 2 %

Micro-Hematocrito:

§   Regla (escuadra) 1:

5.5       —       100%

2.3        —       4 1 .8 %

§   Regleta 2:                                     4 2 %

Prueba a la Inversa

(Prueba para Grupos ABO)

                                     Introducción

En la especie humana existen varios genes diferentes implicados en la compatibilidad o incompatibilidad de las transfusiones de sangre. Los dos grupos principales se conocen como ABO y RH.

El sistema ABO es consecuencia de la presencia de una cubierta de proteína en la cubierta de los glóbulos rojos. Para esta proteína se conoce de dos formas inmunológicamente diferentes la forma A y la forma B se refiere al tipo de proteínas que presentan los glóbulos rojos; en el caso de que no se presente esta proteína se incluye a estos individuos en el grupo sanguíneo O.

El factor Rh corresponde a una proteína de plasma. La presentación de esta proteína es Rh+ y la ausencia Rh-

La determinación del grupo sanguíneo se efectúa enfrentando los hematíes problema con reactivos es indicativa de la presencia de los correspondientes antígenos

Fundamento

El suero del paciente que contiene antígenos se ponen en contacto con los criterios con los eritrocitos que contiene anticuerpos formado un complejo Ag-Ac, que se manifiesta microscópicamente mediante una aglutinación.

Prueba para grupos ABO 

Material:

      Equipo para venopunción

      Placa de vidrio excavada

      Aplicadores de madera

      Eritrocitos lavados A Y B conocidos

       Suero del paciente

Procedimiento:

1.       Se preparan suspensiones de glóbulos rojos al 2% en la siguiente forma, en un tubo de ensayo marcado con la letra A se pone 1 gota de sangre A y otro marcado con la letra B se pone una gota de sangre B, se llenan los tubos con sol. Salina y se centrifugan a 3400 rpm durante 3 minutos y se decanta el líquido sobrenadante invirtiendo los tubos.

2.      A cada uno de los tubos se añade 1 cm de sol. Salina y se resuspenden los glóbulos rojos.

3.       Se ponen dos gotas separadas de suero problema sobre una lámina de vidrio, a la gota de la izquierda se le agrega 1 gota de la suspensión de eritrocitos A y a la derecha 1 gota de la suspensión de eritrocitos B.

 

Interpretación de Resultados:

a)      Si el suero aglutina  a los glóbulos rojos A  ----  tiene Ac A, el suero que tiene Ac A corresponde a la sangre B, el suero problema, corresponde a una sangre del tipo B.

b)     Si el suero problema aglutina eritrocitos B   ----      tiene Ac B, el suero que tiene Ac B corresponde a la sangre A, el suero problema corresponde a una sangre del grupo A.

c)      Si el suero problema aglutina los eritrocitos A y B   ----     tiene Ac A y B, el suero que tiene Ac A y B corresponde a la sangre O, en consecuencia el suero problema corresponde a una sangre del grupo O.

d)     Si el suero problema no aglutina en los glóbulos rojos A y B      ---       no tiene Ac ni A ni B, por lo tanto el suero problema pertenece a una sangre del grupo AB.

Resultados

Nombre:             Yetzabeth Ángeles Cruz

Edad:                 17 años

Sexo:                 Femenino

Grupo Sanguíneo:                     “O”

Conclusiones

Esta prueba es de gran uso en los Bancos de Sangre, ya que corroboran indudablemente los resultados de una tipificación sanguínea hecha en placa. Su exactitud hace que la sangre en caso de una transfusión sea confiable y evitando así posibles reacciones o rechazo.

Coombs

Prueba de Coombs

Introducción

Fue descrita en 1945 por “Cambridge Inmunology” por el Dr. Robin Coombs y el Dr. Arturo Mourant; donde dentro de tubos de prueba se hicieras las diferentes reacciones.

La Prueba de Coombs en un estudio que busca anticuerpos que puedan fijarse a los glóbulos rojos y causar su destrucción prematura (hemólisis).

Fundamento

Esta prueba demuestra la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo (antiglobulina)

{  Coombs directo:

Detecta Ac que ya se han fijado a la superficie de los glóbulos rojos; en pacientes con inicios de reacción hemolítica y el diagnóstico de anemias hemolíticas auto inmunes, hemólisis inducidas por drogas o fármacos (quinidina, metildopa y procainamida), y enfermedad hemolítica del recién nacido.

-La antiglobulina detecta Ac incompletos antieritrocitarios, que ya se encuentran unidos "in vivo" a los hematíes

{  Coombs indirecto:

Busca Ac circulantes libres contra una serie de glóbulos rojos estandarizados; a pacientes politransfundidos, embarazadas, multíparas.

-La antiglobulina detecta Ac incompletos antieritrocitarios no unidos "in vivo" a los hematíes.

-Se realiza en dos fases:

1. Enfrentan Ac frente a hematíes de antigenicidad conocida y provocar su unión

 2. Se añade al antiglobulina hemaglutinante.

{  Coombs cruzado:

Variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientes politransfundidos, pacientes con antecedentes de reacción post transfusional hemolítica y a multíparas para escoger sangre compatible.

Coombs Directo

Material:

       Centrífuga para tubos de mesa

       Tubos de ensayo

       Equipo para venopunción

       Aplicadores de madera

       Anticoagulante EDTA o heparina

       Suero de Coombs poliespecífico

       Suero de Coombs monoespecífico anti IgG y anti C3d.

       Solución salina

Nota:

El suero de Coombs puede ser:

-       Poliespecífico, si está dirigido contra la Ig G y el componente C3d del complemento.

-       Monoespecífico, si solo está dirigido contra la Ig G y algunos de los componentes del complemento.

Técnica

1.        Preparar una suspensión al 5% en solución salina.

2.       Colocar 1 gota de suero de Coombs en 1 tubo.

3.        Añadir 1 - 2 gotas de la suspensión.

4.       Mezclar y centrifugar 1-2 min. a 2000 r.p.m.

5.       Sacar de la centrifuga y resuspender el botón celular y observar.

Interpretación de Resultados:

Aglutinación        presencia de anticuerpos y /o complemento unidos a los hematíes in vivo,

-Repita nuevamente el procedimiento pero utilizando los reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d.

                                 Patrones de reacción

Reactivos monoespecíficos    1           2            3             4

       ______________________________________________

anti Ig G                                    +         +          -           -

anti C3                               -         +          +          -

       ______________________________________________

Valores normales

La falta de agrupación de células (aglutinación), indicando que no hay anticuerpos para los glóbulos rojos, es lo normal.

Coombs Indirecto

Material

       Gradilla  

       Centrifuga  

       Tubos de ensayo  

       Solución salina   

       Pipetas Pasteur                                                               

       Suero Coombs

       Suspensión de hematíes al 5%

Técnica

1.        Preparar una suspensión de hematíes tipo al 5% en solución salina. Colocar en 1 tubo 2 gotas de los hematíes tipo y 2 gotas de suero problema.

2.       Mezclar e incubar a 37ºC durante 30 min.

3.        Lavar 3 veces el producto incubado en solución salina.

4.       Tras el último lavado resuspender el sedimento de hematíes.

5.       Añadir 2 gotas del suero Coombs.

6.        Mezclar bien y centrifugar a 2000 r.p.m. 1-2 min.

7.        Agitar el tubo y observar si hay o no aglutinación.

Interpretación de Resultados

Aglutinación          presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor

-Debe proceder al estudio e identificación de él o los anticuerpos adquiridos.

Valores normales

La falta de agrupación de células (aglutinación), indicando que no hay anticuerpos para los glóbulos rojos, es lo normal.

Conclusiones

Estas pruebas detectan la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, por esta razón son de gran importancia en el diagnóstico de distintas patologías entre las cuales destacan:

Anemia hemolítica auto inmunitaria, trastornos linfoproliferativo, Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica del recién nacido), Lupus eritematoso sistémico e incluso Incompatibilidad sanguínea (cuando se utiliza en bancos de sangre).

Se debe de hacer el uso adecuado de la observación en las reacciones de aglutinación para evitar resultados erróneos.